一、內容簡介

    microRNAs（miRNAs）是一類內源性的非編碼RNA。編碼miRNA的基因組DNA首先轉錄形成長的初始miRNA（pri-miRNA），后經(jīng)Drosha核糖核酸酶切割形成發(fā)夾結構的、約70-90bp的RNA前體（pre-miRNA）。Pre-miRNA又被Dicer酶剪切成約20-25bp的單鏈成熟miRNA，進而發(fā)揮轉錄后調控作用。
    miRNA過表達載體構建的主要原理是將pri-miRNA或pre-miRNA序列插入polII啟動子下游。其中，pri-miRNA（含側翼序列）的方式保留了每個miRNA特有的天然雙臂結構，效果最好。但對于pri-miRNA序列未知的miRNA，更便捷的方法是體外合成pre-miRNA，并構建到帶有mir-30側翼雙臂序列的慢病毒載體中。當miRNA表達載體轉入細胞后，可產(chǎn)生莖環(huán)結構的pri-miRNA或pre-miRNA，進而在細胞內源的miRNA加工機制下被剪切成成熟的miRNA。
二、技術優(yōu)勢

    1、 用途廣泛，既可被包裝產(chǎn)生miRNA慢病毒，又可以質粒形式直接轉染細胞而發(fā)揮調控作用。
    2、 pri-miRNA法保留了miRNA的天然雙臂結構，更接近體內真實情況，效果最好。
    3、 pre-miRNA法可直接合成pre-miRNA，免去了基因調取的流程，易于通量化。

三、服務內容

    1、 合成pre-miRNA或調取pri-miRNA
    2、 目的序列與miRNA慢病毒載體的連接；
    3、 連接產(chǎn)物的轉化；
    4、 測序驗證；

四、服務須知


服務項目客戶提供交付產(chǎn)物實驗周期miRNA過表達慢病毒載體構建（pre-miRNA法）1、pre-miRNA序列
2、指定載體1、miRNA過表達慢病毒載體
2、載體圖譜、測序結果2-3周miRNA過表達慢病毒載體構建（pri-miRNA法）1、攜帶pri-miRNA序列的質粒模板或pri-miRNA序列
2、指定載體1、miRNA過表達慢病毒載體
2、載體圖譜、測序結果3-4周
五、實驗具體周期及費用：請咨詢我司客服人員